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實驗乾貨·▩•◕·!影響ELISA實驗結果的三方面因素

 ELISA法具有靈敏度高✘₪✘✘、特異性強✘₪✘✘、重複性好的特點│↟,並具有操作簡便✘₪✘✘、無放射性危害的優點│↟,但在測定中常會出現一些誤差和問題◕·。我們通過幾年的實驗觀察│↟,認為影響結果的因素有如下方面◕·。
1✘₪✘✘、 試驗儀器
(1)加樣器是否經過校正│↟,酶免測定血清用血量很少│↟,如手工加樣器的效能不好│↟,吸取樣品不精確│↟,會使結果忽高忽低◕·。
(2)每次洗板前│↟,應檢查洗板機針孔有無堵塞◕·。

2✘₪✘✘、試劑盒
(1)抗原✘₪✘✘、抗體活性對效價的影響▩•·▩:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活│↟,結果不易判斷◕·。再有ELISA法靈敏度高│↟,對雜質的反應靈敏度也高│↟,實驗中空白對照OD值偏高或假陽性◕·。

(2)酶結合物濃度過高│↟,也會導致OD值假性增高◕·。

3✘₪✘✘、 操作
(1)檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min後使用│↟,試劑用完及時放回冰箱冷藏│↟,以免造成試驗結果假性降低◕·。
(2)加樣時注意勿觸及包被板底部│↟,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結果的準確性◕·。
(3)洗滌不充分│↟,會使結果假性增高│↟,過分洗滌呈假陰性◕·。
(4)比色時應保持包被孔底部無異物✘₪✘✘、無水汽│↟,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時│↟,底部留有水汽│↟,應將板底擦乾後進行比色│↟,水汽或孔內氣泡也會使OD值升高◕·。
(5)抗原與抗體反應達到完全平衡│↟,依賴於溫度與時間◕·。溫度高於45℃易引起失活及標記物脫落│↟,溫度低於4℃│↟,影響反應速度◕·。總之│↟,由於ELISA實驗的影響因素較多│↟,在實際工作中必須操作規範✘₪✘✘、仔細│↟,避免和排除各種因素的影響│↟,使之得到準確可靠的檢驗結果◕·。

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