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ELISA試劑盒檢測結果分析

1▩▩₪··、ELISA實驗中樣品都要做復孔或三孔✘₪,然後計算每個濃度標準品的平均OD值✘₪,復孔的變異係數應該小於20%↟╃╃☁✘。

2▩▩₪··、平均OD值減去空白孔的OD值↟╃╃☁✘。

3▩▩₪··、製作標準曲線↟╃╃☁✘。

以減去本底後的OD值為X軸✘₪,標準品的濃度為Y軸✘₪,利用作圖軟體得出一個合適的計算方法↟╃╃☁✘。建議使用合適的軟體來作圖✘₪,比如CurveExpert 1.4↟╃╃☁✘。這款軟體能夠給出很多種方法(比如直線▩▩₪··、半對數▩▩₪··、對數▩▩₪··、四引數方程等)並從中選擇一條*合適的方程↟╃╃☁✘。要想檢驗某條曲線是否與表中資料吻合✘₪,可以將標準品的濃度作為未知數✘₪,將對應的OD值帶入該方程✘₪,計算出標準品的濃度✘₪,得到的結果應該與實際濃度很接近(+/-10%)↟╃╃☁✘。選擇擬合度的那條曲線↟╃╃☁✘。

如果出現標準曲線的線性不好✘₪,或平行性不好(雙孔對照孔的OD值差別很大)✘₪,或出現跳孔的現象✘₪,可能引起的原因有酶標板孔間相互汙染▩▩₪··、洗板後未能儘快進行下一步操作▩▩₪··、新增樣品或其它試劑時操作的方法不對▩▩₪··、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發▩▩₪··、酶標板孔問加入的試劑量不同✘₪,相對應的解決辦法是加樣時請小心勿將液體濺人另一孔中✘₪,人工洗板時也請小心✘₪,勿將洗滌液濺人另一微孔中▩▩₪··、在洗板後及時進行下一步操作▩▩₪··、新增試劑時請懸空滴入✘₪,切記勿將槍頭接觸到板孔內✘₪,吸取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭▩▩₪··、確認孵育環境不透光✘₪,蓋板膜將酶標板密封好▩▩₪··、使用已校正過的微量加樣器✘₪,如將次加入液體時槍頭上留有一滴的液體滴下✘₪,那麼將以後槍頭上留有的液體也滴下✘₪,以保證加入液體體積的一致性↟╃╃☁✘。

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